Avaliação de diferentes procedimentos para extração de DNA a partir de esfregaços corados pelo método de Ziehl-Neelsen / Evaluation of different methods of DNA extraction from baciloscopic tests of Ziehl-Neelsen stainig

O Pará é o estado com maior taxa de incidência de tuberculose (TB) na região Norte, com 36,3 casos por 100 mil habitantes em 2004. A obtenção de DNA de qualidade a partir de material fixado em lâminas coradas pelo método de Ziehl-Neelsen (ZN) supriria a falta de amostras representativas para estudos de genotipagem, contribuindo para melhor entendimento da dinâmica de transmissão da TB. O presente estudo avaliou quatro diferentes procedimentos para obtenção de DNA de M. tuberculosis a partir de 196 esfregaços corados pelo método de ZN, que utilizaram xilol e N-acetil-L-cisteína (NALC) em conjunto, de forma isolada ou nenhuma destas substâncias, e ainda dois protocolos de amplificação distintos, um com o adjuvante de PCR glicerol e outro com betaína. O percentual de amplificação foi superior para as amostras que foram submetidas ao procedimento que utilizou somente o xilol e ao que não utilizou nenhuma substância, sendo 77 por cento e 67 por cento, respectivamente, para o protocolo com glicerol, e de 98 por cento e de 96 por cento para o protocolo com betaína. A partir dos resultados obtidos, não é recomendado o uso de xilol ou NALC nos procedimentos de remoção das amostras e sugere-se a inclusão do adjuvante betaína nas reações, assim como o uso do DNA extraído de lâminas coradas pelo método de ZN em análises baseadas em PCR.

Qualidade das baciloscopias de escarro realizadas em oito unidades de saúde no estado do Pará / Quality of the sputum bacilloscopy held in eight health units in the state of Pará

A baciloscopia pelo método de Ziehl-Neelsen (ZN) é um exame simples, rápido, econômico e é a técnica mais difundida para o diagnóstico da tuberculose (TB), pois permite detectar as fontes mais importantes de infecção. O presente trabalho avaliou a qualidade das baciloscopias para tuberculose em oito Unidades Básicas de Saúde (UBS) e encaminhadas ao LACEN-PA, no Estado do Pará. Os itens avaliados foram identificação das lâminas, distensão, coloração dos esfregaços e índice baciloscópico. Dentre as 189 lâminas avaliadas, 36 por cento (69 por 189) foram caracterizadas como inadequadas. Falhas relacionadas ao item distensão foram as mais frequentes (31 por cento), seguidas de problemas na coloração (28 por cento). No item identificação das lâminas, apenas a UBS B apresentou falhas, e estas ocorreram em 100 por cento (4) das lâminas enviadas ao LACEN no período do estudo. A avaliação dos índices bacterioscópicos determinou 10 discordâncias em número de cruzes, um falso-negativo e um falso-positivo. Tais resultados sugerem falta de obediência aos parâmetros de qualidade preconizados pelo Ministério da Saúde. No entanto, recomenda-se a realização de estudo com ampliação do número de amostras e atenção especial as principais causas de erro no desenvolvimento das baciloscopias.

[Nested-PCR for gene that encodes the antigen b applied to the diagnosis of pulmonary tuberculosis]. / Nested-PCR do gene que codifica o antígeno b aplicada ao diagnóstico da tuberculose pulmonar.

The polymerase chain reaction used for amplifying an internal sequence of a previously amplified fragment (nested-PCR) was investigated as a complementary alternative for searching for alcohol-acid resistant bacilli and Mycobacterium tuberculosis cultures in Lowenstein-Jensen medium. 144 sputum samples were investigated from patients with suspected tuberculosis that were sent to the Tuberculosis Laboratory of the Evandro Chagas Institute in Belém, between June 2002 and December 2003. From the 144 samples, 121 were characterized as tuberculosis: 119 were positive in cultures, 95 under bacilloscopy and 128 using nested-PCR. The sensibility of the nested-PCR was 96% (116/121), while the specificity was 48% (11/23). Nested-PCR may be a complementary tool for diagnosing tuberculosis, since it presents sensitivity equivalent to that of cultures. However, further evaluations are needed with the aim of minimizing the number of false-positive results.

Nested-PCR do gene que codifica o antígeno b aplicada ao diagnóstico da tuberculose pulmonar / Nested-PCR for gene that encodes the antigen b applied to the diagnosis of pulmonary tuberculosis

A reação em cadeia da polimerase usada para amplificação de uma seqüência interna de um fragmento previamente amplificado (nested-PCR) foi investigada como uma alternativa complementar a pesquisa de bacilos álcool ácido resistentes e a cultura do Mycobacterium tuberculosis em meio de Lowenstein-Jensen. Foram investigadas 144 amostras de escarro de pacientes suspeitos de tuberculose encaminhados ao Laboratório de Tuberculose do Instituto Evandro Chagas em Belém, no período de junho de 2002 a dezembro de 2003. Das 144 amostras, 121 foram caracterizadas como tuberculose, 119 foram positivas na cultura, 95 na baciloscopia e 128 na nested-PCR. A sensibilidade da nested-PCR foi 96 por cento (116/121), enquanto a especificidade foi 48 por cento (11/23). A nested-PCR poderá ser uma ferramenta complementar para o diagnóstico da tuberculose, pois apresenta sensibilidade equivalente à cultura, no entanto, necessita de maiores avaliações visando minimizar o número de resultados falso-positivos.

The polymerase chain reaction used for amplifying an internal sequence of a previously amplified fragment (nested-PCR) was investigated as a complementary alternative for searching for alcohol-acid resistant bacilli and Mycobacterium tuberculosis cultures in Lowenstein-Jensen medium. 144 sputum samples were investigated from patients with suspected tuberculosis that were sent to the Tuberculosis Laboratory of the Evandro Chagas Institute in Belém, between June 2002 and December 2003. From the 144 samples, 121 were characterized as tuberculosis: 119 were positive in cultures, 95 under bacilloscopy and 128 using nested-PCR. The sensibility of the nested-PCR was 96 percent (116/121), while the specificity was 48 percent (11/23). Nested-PCR may be a complementary tool for diagnosing tuberculosis, since it presents sensitivity equivalent to that of cultures. However, further evaluations are needed with the aim of minimizing the number of false-positive results.